Una prueba molecular epigenómica para la ECV Hemorrágica

En los últimos años ha existido un gran interés por el estudio de los miARN circulantes como biomarcadores para la identificación del ictus. El perfil sanguíneo de miARN obtenido a través de RT-PCR, específicamente hablando de las concentraciones plasmáticas de miR-124-3p y miR-16 detectadas en sangre periférica, han permitido realizar un diagnóstico que discrimina entre una enfermedad cerebro vascular hemorrágica donde el primero se encuentra aumentado, y una enfermedad cerebro vascular de tipo isquémica, correspondiente al segundo miR. Por tanto, miR-124-3p y miR-16 al ser marcadores de diagnóstico, podrían ser clínicamente útiles para el manejo de este tipo de accidentes en su fase aguda.

Referencias Bibliográficas:

1. Gonzalo Calvo D, Iglesias E, Llorente V. Biomarcadores epigenéticos y enfermedad cardiovascular: Los microARN circulantes [Internet] 2017 (citado 30 nov 2019). Disponible en: https://www.revespcardiol.org/es-biomarcadores-epigeneticos-enfermedad-cardiovascular-los-articulo-S0300893217301586

2. Yang L, Pui C, Ki Y, Lin H, Morales J, Feng D, Shun J, Hudson T, Graham C. Comparación de miR -124-3p y miR-16 para el diagnóstico temprano de accidente cerebro vascular hemorrágico e isquémico [Internet]. 2014 (citado 30 nov 2019). Disponible en: https://www.sciencedirect.com/science/article/abs/pii/S0009898114001156?via%3Dihub

Prueba molecular diferente de PCR para la ECV hemorrágica

El diagnóstico molecular nos ha permitido la identificación y cuantificación específica de material genético en una muestra biológica, determinando el causante de la enfermedad: 1)Pirosecuenciación: empleo de una enzima capaz de unirse a nanopartículas y detectar NSE como biomarcador sanguíneo para el diagnóstico de ECV, traduciendo su presencia en forma de luz en la muestra. 2)Técnicas de neuroimagen funcional, bioquímica o molecular como: SPECT, PET y la RMN que permiten la valoración no invasiva del estado funcional, de los cambios de flujo sanguíneo y del metabolismo celular. PET destaca por permitirnos la cuantificación in vivo del metabolismo de tejidos sanos y enfermos.

Referencias bibliográficas:

1.Cohen R, Lata P, Lee Y, crus J, Nishimura N, Schaffer C, Mukai C, Nelson J, Brangman S, Agrawal Y y Travis A. Uso de enzimas ligadas como tecnología de plataforma para la detección rápida de analitos[Internet]. California, 2015. (revisado 25 nov 2015; citado 24 nov 2019) Disponible en: https://journals.plos.org/plosone/article?id=10.1371/journal.pone.0142326
2. Benavides P, Sánchez L, Álvarez P, Manzano V y Zambrano D. Diagnóstico, imagenología y accidente cerebrovascular[Internet] Ambato, 2018(citado 24 nov 2019) Vol 2-3 (1-7). Disponible en:file:///C:/Users/Usuario/Downloads/Dialnet-DiagnosticoImagenologiaYAccidenteCerebrovascular-6282836.pdf
3. Santamarìa R. Secuenciación [Internet]2018. (citado 24 nov 2019) Disponible en:http://vis.usal.es/rodrigo/documentos/bioinfo/temas/8_Secuenciaci%C3%B3n.pdf 

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Prueba de Reacción en Cadena de la Polimerasa en la ECV hemorrágica

ANÁLISIS DE PCR
Tema del artículo	Polimorfismo  del gen E-selectina (S128A) en el accidente cerebro vascular hemorrágico: comparación con el accidente cerebro vascular isquémico
Objetivo médico	Identificar la relación del polimorfismo de E-selectina con la ECV hemorrágica para su prevención y diagnóstico oportuno
Muestra biológica	5 ml de sangre
Tipos de ADN	ADN genómico leucocitario
Gen Amplificado	E-selectina (S128A)
Extracción de ADN	Se añade solución de lisis básica con EDTA, adición de fend y cloroformo, precipitación de la fase acuosa con isopropanol o etanol absoluto y suspención de ADN
PCR	PCR RFLP
Desnaturalización	95 °C 60 seg
Hidridación	50 °C 60 seg
Elongación	72 °C 60 seg
# de ciclos	30 veces
Visualización	Electroforesis (gel de agarosa)
Sensibilidad analítica	NE
Especificidad analítica	NE

Referencias bibliográficas:

Satrupa Das, Sitara Roy, Subhash Koul, Akka Jyothy, Anjana Munshi. E-selectina gene (S128R) polymorphismin hemorrhagic stroke: Comparison with ischemie stroke [Internet]. NCBI, 2014 [revisado 03 oct 2014; consultado 17 nov 2019] (581) 125-128. Disponible en: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/25168603

Prueba de tamizaje y confirmatoria para la ECV hemorrágica

Las pruebas de detección (tamizaje) son exámenes de medición e identificación de trastornos metabólicos, genéticos y del desarrollo en una población susceptible a tener una determinada patología asintomática hasta el momento, realizando una primera aproximación diagnóstica que será validada con una prueba confirmatoria.

En el caso de la ECV el tamizaje inicial se realiza a través del uso de:

 Escala de evaluación de Cincinnati (CPSS):

 Escala los Ángeles:

Escala de Hunt y Hess:

Las pruebas confirmatorias son las siguientes:

Tomografía computarizada (TC):

Angiografía: 

Electroencefalograma: 

Fonoangiografía carotídea: 

Resonancia magnética: 

Ecografías cerebrales: 

Biopsia de músculo y nervio: 

Análisis de líquido cefalorraquídeo:

Referencias bibliográficas:
1. Neurowikia. Escalas neurológicas en patología vascular cerebral [Internet] Sociedad española de neurología. [citado 09 nov 2019]. Disponible en: http://www.neurowikia.es/content/escalas-neurol%C3%B3gicas-en-patolog%C3%AD-vascular-cerebral
2. Mayo Clinic. Accidente cerebrovascular [Internet] Arizona, 2019. [revisado 05 sep 2019citado 09 nov 2019]. Disponible en: https://www.mayoclinic.org/es-es/diseases-conditions/stroke/diagnosis-treatment/drc-20350119
3. Chamorro A, Renú A, Fernández A, Urra X. ¿Qué es el código ictus?  [Internet] Barcelona, 2018[revisado 08 ago 2018; citado 09 nov 2019]. Disponible en: https://www.clinicbarcelona.org/asistencia/enfermedades/ictus/pruebas-y-diagnostico

Alteraciones de la Epigenómica en la ECV hemorrágica

La epigenómica resultan de la interacción genético-ambiental. Estrés: los individuos presentan hipometilación del DNA global y metilación de ADN en promotores de genes específicos como MTHFR, KCC1, THBS1, ER y en pacientes con enfermedades hereditarias (síndrome de Ehlers-Danlos, Marfan, enfermedad de Fabry, entre otras). Alteraciones en la acetilación de histonas y su cromatina asociadas a muerte celular neuronal, excitotoxicidad, estres oxidativo, etc. Alteraciones genéticas relacionadas con el riesgo de IA en células endoteliales: se destaca la presencia de regiones de ADN metiladas en varios bloques LD, lo que sugiere que los SNP podrían estar asociados con la reorganización de la matriz extracelular y la actividad endopeptidasa.



Referencias bibliográficas: 
1. Caballero I. Modificaciones epigenéticas del ictus cerebral[Internet]. Barcelona; 2015[citado 03 nov 2019]. Disponible en: https://ddd.uab.cat/pub/tfg/2015/142551/TFG_iracemacaballeromunoz.pdf
2. Poppenberg K, Jiang K, Tso M, Snyder K, Siddiqui A, Kolega J, Jarvis J, Meng H y Tutino V. Los paisajes epigenéticos sugieren que el riesgo genético de aneurisma intracraneal opera en el endotelio [Internet]. NY; 2019 [revisado 30 oct 2019; citado 03 nov 2019]. Disponible en: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/31666072